home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Pier Shareware 6 / The_Pier_Shareware_Number_6_(The_Pier_Exchange)_(1995).iso / 026 / med9408e.zip / M9480838.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-09-05  |  3KB  |  43 lines
  1.        Document 0838
  2.  DOCN  M9480838
  3.  TI    Detection of HIV-1 proviral DNA by polymerase chain reaction using an
  4.        electrochemiluminescent-tagged probe.
  5.  DT    9410
  6.  AU    Schutzbank TE; Smith J; Greeley C; Children's Hospital National Medical
  7.        Center, Washington, D.C.
  8.  SO    Abstr Gen Meet Am Soc Microbiol. 1994;94:555 (abstract no. C-367).
  9.        Unique Identifier : AIDSLINE ASM94/94313107
  10.  AB    We have developed a rapid, pseudo-homogeneous assay for the detection of
  11.        PCR amplicons, based on the use of electroluminescence generated from a
  12.        Tris-bipyridine ruthinium (II) (Ru(bpy)3(3+)) label. PCR amplification
  13.        of highly conserved HIV-1 gag gene sequences were performed using
  14.        SK38/SK39 primers, where the latter was 5'-biotinylated. Post-PCR
  15.        reactions were mixed with 10(12) copies of the SK19 probe-Ru(bpy)2(3+)
  16.        NHS ester conjugate, denatured by heating at 100 degrees C for 5
  17.        minutes, and hybridized at 55 degrees C for an additional 15 minutes.
  18.        Hybridization to the biotinylated strand of the amplified DNA was
  19.        determined by the addition of streptavidin-conjugated magnetic
  20.        particles, and analysis on an Origen-1 electroluminescence analyzer. Our
  21.        results demonstrated a sensitivity of less than 5 copies of HIV-1
  22.        (pre-PCR), using either purified plasmid DNA containing one complete
  23.        copy of the HIV-1 cDNA genome, or lysed, proteinase K treated 8E5 cells
  24.        as the starting material. In an evaluation with actual clinical
  25.        specimens, (peripheral blood monocytes from both normal and
  26.        HIV-1-infected children), the electroluminescent detection assay
  27.        correlated 100% with our standard method (solution hybridization with a
  28.        radiolabeled probe followed by polyacrylamide gel electrophoresis [PAGE]
  29.        and autoradiography). The electroluminescent method was substantially
  30.        easier to perform than either PAGE or microtiter plate assays, and was
  31.        considerable faster than either of these alternative formats.
  32.  DE    Acquired Immunodeficiency Syndrome/BLOOD/*DIAGNOSIS/IMMUNOLOGY  Base
  33.        Sequence  Chemiluminescence  Child  Conserved Sequence  DNA Primers
  34.        DNA, Viral/*BLOOD  Electrochemistry/*METHODS  Electrophoresis,
  35.        Polyacrylamide Gel  *Genes, gag  Human  HIV-1/GENETICS/*ISOLATION &
  36.        PURIF  Monocytes/MICROBIOLOGY  Oligonucleotide Probes  Polymerase Chain
  37.        Reaction/*METHODS  Proviruses/GENETICS/*ISOLATION & PURIF  Reference
  38.        Values  MEETING ABSTRACT
  39.  
  40.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  41.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  42.  
  43.