home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Pier Shareware 6 / The_Pier_Shareware_Number_6_(The_Pier_Exchange)_(1995).iso / 026 / med9408e.zip / M9480837.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-09-05  |  3KB  |  47 lines
  1.        Document 0837
  2.  DOCN  M9480837
  3.  TI    Immunomagnetic capture of CD4+ cells from whole blood for HIV detection
  4.        by PCR.
  5.  DT    9410
  6.  AU    Piccoli SP; Ekeze TE; Gross S; Mehta RR; Kerschner JH; Immunicon Corp.,
  7.        Huntingdon Valley, PA.
  8.  SO    Abstr Gen Meet Am Soc Microbiol. 1994;94:555 (abstract no. C-366).
  9.        Unique Identifier : AIDSLINE ASM94/94313108
  10.  AB    Rapid diagnosis of HIV infection may be greatly facilitated by direct
  11.        identification of the provirus, regardless of the time course of
  12.        antibody response. Toward this end, we have developed a system to permit
  13.        specific isolation of CD4+ T-cells for subsequent genetic analysis by
  14.        PCR. Samples of whole blood (50-75% v/v in PBS) were incubated with an
  15.        anti-CD4 monoclonal antibody. A ferrofluid (colloidal magnetite, Fe3O4),
  16.        coated with goat anti-mouse Fc antibodies, was added to magnetically
  17.        label the target CD4+ cells. Samples were then subjected to a brief high
  18.        gradient magnetic separation (HGMS) to isolate the cells. To ensure
  19.        complete removal of erythrocytes, the cells were resuspended and
  20.        magnetically washed. Lysis was accomplished in a Proteinase K/Tween 20
  21.        buffer at ambient temperature. Following heat inactivation of the
  22.        enzyme, aliquots were subjected to PCR. All results were confirmed by
  23.        probe hybridization to the product. In an initial study, twelve blinded
  24.        samples from previously diagnosed patients or negative controls were
  25.        examined for the presence of HIV using this procedure. All samples were
  26.        found to be in agreement with serology and clinical diagnoses (10 HIV
  27.        seropositive and 2 HIV seronegative) by appropriate detection of the
  28.        presence or absence of the provirus. The sensitivity of this method was
  29.        found to be equivalent to others such as Ficoll-Hypaque cell separation
  30.        or erythrocyte removal by ammonium chloride lysis, followed by WBC lysis
  31.        to release DNA and/or phenol/chloroform extraction. Similar results with
  32.        mock-infected samples indicated a sensitivity limit of 10 HIV genome
  33.        equivalents added to the final cell lysate. CD4+ cells were isolated in
  34.        approximately 95% yield with approximately 95% purity as analyzed by
  35.        flow cytometry. These data suggest that biologically active ferrofluids
  36.        represent a rapid (< 30 minutes) and efficient method for preparation of
  37.        peripheral blood cell subsets for diagnostic analysis by PCR.
  38.  DE    Acquired Immunodeficiency Syndrome/*DIAGNOSIS  Cell Separation/*METHODS
  39.        Flow Cytometry  Human  HIV/*ISOLATION & PURIF  *HIV Seronegativity  HIV
  40.        Seropositivity/*DIAGNOSIS  Lymphocyte Subsets/CYTOLOGY/PATHOLOGY
  41.        Magnetics  Polymerase Chain Reaction/*METHODS  Proviruses/ISOLATION &
  42.        PURIF  T4 Lymphocytes/CYTOLOGY/*MICROBIOLOGY/PATHOLOGY  MEETING ABSTRACT
  43.  
  44.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  45.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  46.  
  47.