home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Pier Shareware 6 / The_Pier_Shareware_Number_6_(The_Pier_Exchange)_(1995).iso / 026 / med9410a.zip / M94A0153.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-10-01  |  3KB  |  47 lines
  1.        Document 0153
  2.  DOCN  M94A0153
  3.  TI    The HIV-1 protease as enzyme and substrate: mutagenesis of autolysis
  4.        sites and generation of a stable mutant with retained kinetic
  5.        properties.
  6.  DT    9412
  7.  AU    Mildner AM; Rothrock DJ; Leone JW; Bannow CA; Lull JM; Reardon IM;
  8.        Sarcich JL; Howe WJ; Tomich CS; Smith CW; et al; Biochemistry Unit,
  9.        Upjohn Laboratories, Kalamazoo, Michigan; 49001.
  10.  SO    Biochemistry. 1994 Aug 16;33(32):9405-13. Unique Identifier : AIDSLINE
  11.        MED/94347706
  12.  AB    Site-directed mutagenesis of autolysis sites in the human
  13.        immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) protease was applied in an
  14.        analysis of enzyme specificity; the protease served, therefore, as both
  15.        enzyme and substrate in this study. Inspection of natural substrates of
  16.        all retroviral proteases revealed the absence of beta-branched amino
  17.        acids at the P1 site and of Lys anywhere from P2 through P2'.
  18.        Accordingly, several mutants of the HIV-1 protease were engineered in
  19.        which these excluded amino acids were substituted at their respective P
  20.        positions at the three major sites of autolysis in the wild-type
  21.        protease (Leu5-Trp6, Leu33-Glu34, and Leu63-Ile64), and the mutant
  22.        enzymes were evaluated in terms of their resistance to autodegradation.
  23.        All of the mutant HIV-1 proteases, expressed as inclusion bodies in
  24.        Escherichia coli, were enzymatically active after refolding, and all
  25.        showed greatly diminished rates of cleavage at the altered autolysis
  26.        sites. Some, however, were not viable enzymatically because of poor
  27.        physical characteristics. This was the case for mutants having Lys
  28.        replacements of Glu residues at P2' and for another in which all three
  29.        P1 leucines were replaced by Ile. However, one of the mutant proteases,
  30.        Q7K/L33I/L63I, was highly resistant to autolysis, while retaining the
  31.        physical properties, specificity, and susceptibility to inhibition of
  32.        the wild-type enzyme. Q7K/L33I/L63I should find useful application as a
  33.        stable surrogate of the HIV-1 protease. Overall, our results can be
  34.        interpreted relative to a model in which the active HIV-1 protease dimer
  35.        is in equilibrium with monomeric, disordered species which serve as the
  36.        substrates for autolysis.
  37.  DE    Amino Acid Sequence  Comparative Study  HIV
  38.        Protease/GENETICS/*METABOLISM  HIV Protease Inhibitors/PHARMACOLOGY
  39.        HIV-1/*ENZYMOLOGY  Models, Molecular  Molecular Sequence Data
  40.        Mutagenesis, Site-Directed  Oligopeptides/METABOLISM  Protein
  41.        Conformation  *Protein Processing, Post-Translational
  42.        Structure-Activity Relationship  Substrate Specificity  JOURNAL ARTICLE
  43.  
  44.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  45.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  46.  
  47.