home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Pier Shareware 6 / The_Pier_Shareware_Number_6_(The_Pier_Exchange)_(1995).iso / 026 / med9408e.zip / M9480851.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-09-05  |  2KB  |  39 lines
  1.        Document 0851
  2.  DOCN  M9480851
  3.  TI    Dilutional analysis with a nested PCR--a method for quantitating feline
  4.        immunodeficiency virus provirus in cat tissues.
  5.  DT    9410
  6.  AU    Read R; Nie LC; Lu YS; Richardson JA; Pakes SP; University of Texas
  7.        Southwestern Medical Center, Dallas.
  8.  SO    Abstr Gen Meet Am Soc Microbiol. 1994;94:485 (abstract no. T-19). Unique
  9.        Identifier : AIDSLINE ASM94/94313094
  10.  AB    Most quantitative methods in PCR are subject to error due to the
  11.        efficiency with which chosen primers amplify target sequences compared
  12.        to reference sequences, and in some systems, the degree to which the
  13.        amplified product hybridizes with a labelled probe. To quantitate
  14.        provirus in biological samples, we use a highly sensitive nested PCR
  15.        which produces the same amount of final amplified product from a single
  16.        copy of target sequence as it does with several logs of target sequence.
  17.        Samples are diluted until they give positive and negative results and
  18.        the most probable concentration of provirus is derived from the Poisson
  19.        distribution and the dilution factor. With plasmid DNA as template,
  20.        diluted to approximately one copy per sample volume (10 microliters),
  21.        the PCR gives results consistent with the expected Poisson distribution.
  22.        Biological samples are digested to give crude lysates which show
  23.        generally the same threshold effect, although a small percentage of
  24.        weaker bands is seen with biological samples. Five cats infected for
  25.        three years with the Petaluma isolate of FIV have 6 x 10(2) to 2 x 10(5)
  26.        copies of provirus per mm3 lymph node tissue with significant levels in
  27.        spleen, liver, lung, salivary gland, gut and bone marrow. The test is
  28.        very reliable, non-radioactive and more sensitive than single-stage PCR
  29.        but requires multiple determinations to give precise quantitation.
  30.  DE    Animal  Cats  DNA, Viral/ANALYSIS  Feline Acquired Immunodeficiency
  31.        Syndrome/DIAGNOSIS/MICROBIOLOGY  Immunodeficiency Virus,
  32.        Feline/*ISOLATION & PURIF  Organ Specificity  Plasmids  Poisson
  33.        Distribution  Polymerase Chain Reaction/*METHODS  Proviruses/*ISOLATION
  34.        & PURIF  Sensitivity and Specificity  MEETING ABSTRACT
  35.  
  36.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  37.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  38.  
  39.