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Text File  |  1996-02-26  |  3.2 KB  |  51 lines
  1.        Document 0403
  2.  DOCN  M9620403
  3.  TI    Negative regulation of the adeno-associated virus (AAV) P5 promoter
  4.        involves both the P5 rep binding site and the consensus ATP-binding
  5.        motif of the AAV Rep68 protein.
  6.  DT    9602
  7.  AU    Kyostio SR; Wonderling RS; Owens RA; Laboratory of Molecular and
  8.        Cellular Biology, National Institute; of Diabetes and Digestive and
  9.        Kidney Diseases, National; Institutes of Health, Bethesda, MD
  10.        20892-0840, USA.
  11.  SO    J Virol. 1995 Nov;69(11):6787-96. Unique Identifier : AIDSLINE
  12.        MED/96013773
  13.  AB    Transcript levels from the P5 promoter of adeno-associated virus type 2
  14.        (AAV) are negatively regulated by the AAV Rep78 and Rep68 proteins in
  15.        the absence of helper virus. We have identified a Rep-responsive
  16.        negative cis element of the P5 promoter between the P5 TATA box and
  17.        transcription start site by using 5' and 3' deletions of the P5 promoter
  18.        fused to the chloramphenicol acetyltransferase gene. This element
  19.        contains four imperfect GAGC repeats similar to the Rep recognition
  20.        sequences (RRSs) in the AAV inverted terminal repeats and in the AAV
  21.        preferred integration locus in chromosome 19. Band shift analyses showed
  22.        that human 293 cell nuclear extracts containing Rep68 or Rep68/K340H, a
  23.        putative nucleoside triphosphate (NTP)-binding-site mutant of Rep68,
  24.        formed Rep-specific complexes with this P5 RRS DNA. Within the P5 RRS,
  25.        mutation of a cytosine at position 273 in the AAV sequence to guanine
  26.        abolished Rep68 binding to the DNA. A mutation in the P5 RRS within a
  27.        full-length AAV genome, which abolished Rep binding, resulted in a 40 to
  28.        50% reduction in the ability of wild-type Rep68 to inhibit the
  29.        accumulation of P5 transcripts in vivo. In contrast, the Rep68/K340H
  30.        mutant was unable to down-regulate this mutated promoter. These results
  31.        indicate that there are at least two mechanisms involved in the negative
  32.        regulation of P5 transcript levels by Rep68; one involves Rep68 binding
  33.        to the P5 RRS, and another requires the region of Rep68 containing the
  34.        consensus NTP-binding motif. Furthermore, our studies of AAV genomes
  35.        containing mutated RRS- and/or YY1-binding elements suggest that
  36.        transcription factor YY1 binding to the transcription start site of P5
  37.        interferes with Rep68 repression of the P5 promoter.
  38.  DE    Adenosine Triphosphate/*METABOLISM  Base Sequence  Binding Sites  Cell
  39.        Line  Chloramphenicol Acetyltransferase  Chromosome Mapping
  40.        *Chromosomes, Human, Pair 19  Consensus Sequence  Dependovirus/*GENETICS
  41.        DNA Mutational Analysis  DNA-Binding Proteins/*METABOLISM  *Gene
  42.        Expression Regulation, Viral  Human  HIV Long Terminal Repeat  Kidney
  43.        Molecular Sequence Data  Plasmids  *Promoter Regions (Genetics)  RNA,
  44.        Messenger/BIOSYNTHESIS  Sequence Deletion  Transcription, Genetic
  45.        Transfection  TATA Box  Viral Proteins/*METABOLISM  *Virus Integration
  46.        JOURNAL ARTICLE
  47.  
  48.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  49.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  50.  
  51.